全能型质粒小量提取试剂盒(PD1228)

EZgene™ All Inclusive Plasmid Miniprep Kit

货号	规格	目录价
BW-PD1228-01	50 T	244.00
BW-PD1228-02	250 T	1089.00

分类：

生物试剂质粒提取系列质粒小提质粒小提-硅胶膜法-常规小量提取

描述

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注意事项

常见问题

本款产品是全球唯一的全能环保型质粒小提试剂盒，把四种实验方案完美的结合，做到高得率、高纯度、省时、环保等突出优势，几乎可以满足所有下游实验的需求。

方案一：可在25分钟内处理1～5 mL的菌液，得到至多40 µg的质粒DNA；

方案二：可在30分钟内处理1～12 mL的菌液，得到至多120 µg的质粒DNA；

方案三：可在10分钟内处理1-2 mL的菌液，可获得至多30 µg的质粒DNA；

方案四：可在30分钟内从1-5 mL菌液中得到转染级别的质粒DNA，可获得至40 µg的质粒DNA。

产品特点：

1）得率高：单管每次至多可得120 μg（方案二）；

2）速度快：单次实验仅需10分钟（方案三）；

3）高纯度：转染级别（方案四）

4）环保：无离液盐（方案三）

5）安全：无离液盐（方案三）

BW-PD1228 英

BW-PD1228（简易版）.pdf

1）使用本试剂盒前，请仔细阅读说明书并遵守操作流程；
2）保存条件：RNase A储存于室温（15~25℃），Buffer A1加入RNase A 后储存于4℃，其它组分储存于室温（15~25℃）；
3) 如有疑问，欢迎致电400-115-2855。

问题1：质粒提取得率低

原因1：样本拷贝数低。不同质粒载体因拷贝数差异会造成产量有明显的波动。对于低拷贝质粒应加大菌液使用量，同时按照比例增加Buffer A1、Buffer B1和Buffer C1的用量。洗脱液使用前先放置65℃预热，以增加洗脱效率。低拷贝质粒例如：pET系列，pWE15，SuperCos，pBR322，pACYC及其衍生载体，pSC101及其衍生载体等。

原因2：样本拷贝数低。不同质粒载体因拷贝数差异会造成产量有明显的波动。对于低拷贝质粒应加大菌液使Buffer B1溶液温度低于15℃时，会有晶体析出，使用前需要放置37℃水浴锅加热溶解，呈现澄清透亮状态方可使用。

原因3：裂解时间过短，裂解不充分。加入裂解液后，需要一定的时间进行裂解，一般时间控制再5min以内，当样本从浑浊样变成澄清，说明裂解完全。

原因4：培养过程质粒丢失。甘油菌菌种保存过程中存在质粒丢失现象，建议培养细菌前先划线或涂布平板活化菌种，以稳定产量。

原因5：培养时间过长，抗生素失效。细菌的培养时间不要超过16 h，发生溶菌将降低质粒质量，最好控制在14小时。

原因6：宿主菌株差异性。不同宿主对质粒产量也会产生影响。建议使用end A-大肠杆菌菌株，如DH5α、TOP10及XL10等

问题2：RNA污染

原因1：RNAase失活或者活力下降。已加入RNase A的Buffer A1长时间室温放置可能会出现酶活下降，使用后应及时放回4℃冰箱。

原因2：样本量过多，超过RNAase处理量。由于菌体数量过多，导致Buffer A1中RNase A不足以消化菌体中的RNA，建议等比例增加Buffer A1用量或者减少菌液量。

原因3：醇类加入过多。加入无水乙醇时请严格按照说明书操作，异丙醇加入实际上清体积的0.3倍。

问题3：基因组污染

原因1：裂解力度过大。解时建议轻轻反转，避免裂解过度导致质粒与基因组断裂。

原因2：中和力度过大。中和时不可使用振荡器震荡，因轻柔反转，中和后状态呈现豆花状，即中和完全。