BW-DR3111.pdf

BW-DR3111简易版.pdf

问题1：柱子堵塞

原因1：样本量太多或太粘稠：建议减少样本量，如样本太粘稠建议使用PBS稀释，按照1：1

原因2：组织样本破碎不充分：如样本是组织样本时候建议将其研磨充分，取样时候避免吸取块状样本。

问题2：少量或没有RNA沉淀下来

原因1：特殊样品组织，极度分化、含细胞数量太少，建议再次洗脱；洗脱前对洗脱液预热到65℃；离心前柱子在65℃预热10 min

原因2：柱子过载，建议减少起初样品量

问题3：RNA降解

原因1：样本问题，建议尽快用液氮冷冻样品；尽量使用新鲜样品提取RNA，或尽快裂解样品；尽可能按照说明书进行操作，快速操作。

原因2：RNase污染，建议操作中减少RNase污染；检查缓冲液是否有RNase污染。

问题4：纯度差

原因1：醇类已经盐类影响。建议RNA Wash Buffer与DNA wash Buffer必须加入等比例乙醇，并且必须在室温下保存和使用；使用RNA Wash Buffer与DNA wash Buffer再洗涤一次；确保RNA Wash Buffer与DNA wash Buffer 加入等比例乙醇。

问题5：得率低

原因1：RNA降解。建议提取过程尽量在冰面上操作。

原因2：样本问题。建议样本保存太久，建议使用新鲜样本。

原因3：洗脱不完全。建议洗脱液温度低，建议按照说明书操作提取放置55℃水浴锅加热；洗脱液体积少：建议按照说明书50-100ul洗脱。

原因4：样本裂解不充分。建议样本与Proteinase K混合不充分，导致孵育处理样本裂解不完全，建议使用振荡器震荡混匀；或者样本量太多太粘稠，建议样本量按照说明书用量提取，如样本太粘稠，建议使用PBS稀释。

原因5：RNA/DNA wash Buffer 未加入等比例乙醇。建议确保RNA Wash Buffer与DNA wash Buffer 加入等比例乙醇。

问题5：跑电泳条带降解

原因1：建议跑电泳时在冰面上跑胶，可以避免RNA在跑电泳过程中因为温度太高降解。